Τι είναι η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου;

Ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου

Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια θεμελιώδης τεχνική σε εργαστήρια σε όλους τους βιολογικούς κλάδους, που επιτρέπει τον διαχωρισμό μακρομορίων όπως το DNA, το RNA και οι πρωτεΐνες. Διαφορετικά μέσα διαχωρισμού και μηχανισμοί επιτρέπουν σε υποσύνολα αυτών των μορίων να διαχωριστούν πιο αποτελεσματικά με την εκμετάλλευση των φυσικών τους χαρακτηριστικών. Ειδικά για τις πρωτεΐνες, η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου (PAGE) είναι συχνά η τεχνική επιλογής.

Η PAGE είναι μια τεχνική που διαχωρίζει μακρομόρια όπως πρωτεΐνες με βάση την ηλεκτροφορητική κινητικότητά τους, δηλαδή την ικανότητα των αναλυτών να κινούνται προς ένα ηλεκτρόδιο αντίθετου φορτίου. Στο PAGE, αυτό καθορίζεται από το φορτίο, το μέγεθος (μοριακό βάρος) και το σχήμα του μορίου. Οι αναλύτες κινούνται μέσω των πόρων που σχηματίζονται σε γέλη πολυακρυλαμιδίου. Σε αντίθεση με το DNA και το RNA, οι πρωτεΐνες ποικίλλουν ανάλογα με τα αμινοξέα που ενσωματώνονται, τα οποία μπορούν να επηρεάσουν τον τρόπο λειτουργίας τους. Οι χορδές αμινοξέων μπορεί επίσης να σχηματίσουν δευτερεύουσες δομές που επηρεάζουν το φαινομενικό τους μέγεθος και κατά συνέπεια τον τρόπο με τον οποίο μπορούν να κινηθούν μέσα στους πόρους. Μπορεί επομένως μερικές φορές να είναι επιθυμητή η μετουσίωση των πρωτεϊνών πριν από την ηλεκτροφόρηση για τη γραμμικοποίησή τους εάν απαιτείται πιο ακριβής εκτίμηση του μεγέθους.

ΣΕΛΙΔΑ SDS

Η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου με θειικό νάτριο-δωδεκυλεστέρα είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό πρωτεϊνικών μορίων μαζών από 5 έως 250 kDa. Οι πρωτεΐνες διαχωρίζονται αποκλειστικά με βάση το μοριακό τους βάρος. Το δωδεκυλοθειικό νάτριο, ένα ανιονικό επιφανειοδραστικό, προστίθεται στην παρασκευή πηκτωμάτων που καλύπτει τα εγγενή φορτία των δειγμάτων πρωτεΐνης και τους δίνει παρόμοια αναλογία φορτίου προς μάζα. Με απλά λόγια, μετουσιώνει τις πρωτεΐνες και τους δίνει αρνητικό φορτίο.

Εγγενής ΣΕΛΙΔΑ

Το Native PAGE είναι μια τεχνική που χρησιμοποιεί μη μετουσιωμένα πηκτώματα για τον διαχωρισμό των πρωτεϊνών. Σε αντίθεση με το SDS PAGE, δεν προστίθεται μετουσιωτικός παράγοντας στην παρασκευή πηκτωμάτων. Ως αποτέλεσμα, ο διαχωρισμός των πρωτεϊνών γίνεται με βάση το φορτίο και το μέγεθος των πρωτεϊνών. Σε αυτή την τεχνική, η διαμόρφωση, η αναδίπλωση και οι αλυσίδες αμινοξέων των πρωτεϊνών είναι οι παράγοντες από τους οποίους εξαρτάται ο διαχωρισμός. Οι πρωτεΐνες δεν καταστρέφονται σε αυτή τη διαδικασία και μπορούν να ανακτηθούν μετά την ολοκλήρωση του διαχωρισμού.

Πώς λειτουργεί η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου (PAGE);

Η βασική αρχή του PAGE είναι ο διαχωρισμός των αναλυτών περνώντας τους μέσω των πόρων μιας γέλης πολυακρυλαμιδίου χρησιμοποιώντας ηλεκτρικό ρεύμα. Για να επιτευχθεί αυτό, ένα μείγμα ακρυλαμιδίου-δισακρυλαμιδίου πολυμερίζεται (πολυακρυλαμίδιο) με την προσθήκη υπερθειικού αμμωνίου (APS). Η αντίδραση, η οποία καταλύεται από την τετραμεθυλαιθυλενοδιαμίνη (TEMED), σχηματίζει μια διχτυωτή δομή με πόρους μέσω των οποίων μπορούν να κινηθούν οι αναλυόμενες ουσίες (Εικόνα 2). Όσο υψηλότερο είναι το ποσοστό του συνολικού ακρυλαμιδίου που περιλαμβάνεται στο πήκτωμα, τόσο μικρότερο είναι το μέγεθος των πόρων, επομένως τόσο μικρότερες είναι οι πρωτεΐνες που θα μπορούν να περάσουν. Η αναλογία ακρυλαμιδίου προς δισακρυλαμίδιο επηρεάζει επίσης το μέγεθος των πόρων, αλλά αυτό συχνά διατηρείται σταθερό. Τα μικρότερα μεγέθη πόρων μειώνουν επίσης την ταχύτητα με την οποία οι μικρές πρωτεΐνες είναι σε θέση να κινηθούν μέσα από το πήκτωμα, βελτιώνοντας την ανάλυσή τους και εμποδίζοντάς τους να εκχυλίσουν γρήγορα στο buffer όταν εφαρμόζεται ρεύμα.

Εξοπλισμός για ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου

Κυψέλη ηλεκτροφόρησης γέλης (δεξαμενή/θάλαμος)
Η δεξαμενή γέλης για ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου (PAGE) είναι διαφορετική από τη δεξαμενή γέλης αγαρόζης. Η δεξαμενή γέλης αγαρόζης είναι οριζόντια, ενώ η δεξαμενή PAGE είναι κάθετη. Με κάθετη κυψέλη ηλεκτροφόρησης (δεξαμενή/θάλαμος), μια λεπτή γέλη (συνήθως 1,0 mm ή 1,5 mm) χύνεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και τοποθετείται έτσι ώστε το κάτω μέρος της γέλης να βυθίζεται σε ρυθμιστικό σε έναν θάλαμο και το πάνω μέρος να βυθίζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα σε άλλο θάλαμο. Όταν εφαρμόζεται ρεύμα, μια μικρή ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος μεταναστεύει μέσω της γέλης από τον επάνω θάλαμο στον κάτω θάλαμο. Με ισχυρούς σφιγκτήρες που εγγυώνται ότι το συγκρότημα παραμένει σε όρθια θέση, ο εξοπλισμός διευκολύνει τις γρήγορες εργασίες γέλης με ομοιόμορφη ψύξη με αποτέλεσμα διακριτές ζώνες.

Η Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) κατασκευάζει μια σειρά μεγεθών κυψελών ηλεκτροφόρησης γέλης πολυακρυλαμιδίου (δεξαμενές/θάλαμοι). Τα μοντέλα DYCZ-20C και DYCZ-20G είναι κύτταρα κάθετης ηλεκτροφόρησης (δεξαμενές/θάλαμοι) για ανάλυση αλληλουχίας DNA. Ορισμένες από τις κατακόρυφες κυψέλες ηλεκτροφόρησης (δεξαμενές/θάλαμοι) είναι συμβατές με το σύστημα στύπωσης, όπως τα μοντέλα DYCZ-24DN, DYCZ-25D και DYCZ-25E είναι συμβατά με το σύστημα Western Blotting μοντέλα DYCZ-40D, DYCZ-40G και DYCZ-40F, που χρησιμοποιούνται για τη μεταφορά του μορίου πρωτεΐνης από το πήκτωμα στη μεμβράνη. Μετά την ηλεκτροφόρηση SDS-PAGE, το Western Blotting είναι μια τεχνική για την ανίχνευση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης σε ένα μείγμα πρωτεϊνών. Μπορείτε να επιλέξετε αυτά τα συστήματα στύπωσης σύμφωνα με τις πειραματικές απαιτήσεις.

Τροφοδοτικό Ηλεκτροφόρησης
Για να παρέχετε την ηλεκτρική ενέργεια για τη λειτουργία του τζελ, θα χρειαστείτε τροφοδοτικό ηλεκτροφόρησης. Στη Liuyi Biotechnology παρέχουμε μια σειρά από τροφοδοτικά ηλεκτροφόρησης για όλες τις εφαρμογές. Τα μοντέλα DYY-12 και DYY-12C με υψηλή σταθερή τάση και ρεύμα μπορούν να ικανοποιήσουν την ηλεκτροφόρηση απαιτήσεων υψηλής τάσης. Έχει τη λειτουργία βάσης, χρονισμού, VH και βήμα προς βήμα εφαρμογής. Είναι ιδανικά για εφαρμογή ηλεκτροφόρησης αλληλουχίας IEF και DNA. Για γενική εφαρμογή ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών και DNA, έχουμε τα μοντέλα DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 κ.λπ., τα οποία είναι επίσης τροφοδοτικά καυτών πωλήσεων με κυψέλες ηλεκτροφόρησης (δεξαμενές/θάλαμοι). Αυτά μπορούν να χρησιμοποιηθούν για εφαρμογές ηλεκτροφόρησης μέσης και χαμηλής τάσης, όπως για σχολικό εργαστήριο, νοσοκομειακό εργαστήριο και ούτω καθεξής. Περισσότερα μοντέλα για τροφοδοτικά, επισκεφτείτε την ιστοσελίδα μας.

Η μάρκα Liuyi έχει περισσότερα από 50 χρόνια ιστορίας στην Κίνα και η εταιρεία μπορεί να παρέχει σταθερά και υψηλής ποιότητας προϊόντα σε όλο τον κόσμο. Μέσα από την ανάπτυξη ετών, αξίζει την επιλογή σας!

Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με εμάς, επικοινωνήστε μαζί μας μέσω email[email προστατευμένο] or [email προστατευμένο].

Αναφορές για Τι είναι η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου;
1. Karen Steward PhD Ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου, πώς λειτουργεί, παραλλαγές τεχνικής και οι εφαρμογές της