Μοιραστήκαμε αρκετές σκέψεις την περασμένη εβδομάδα για τη χρήση ηλεκτροφόρησης μεμβράνης οξικής κυτταρίνης και θα ολοκληρώσουμε αυτό το θέμα εδώ σήμερα για αναφορά σας.
Επιλογή του Συγκέντρωση ρυθμιστικού διαλύματος
Η συγκέντρωση ρυθμιστικού διαλύματος που χρησιμοποιείται στην ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης είναι γενικά χαμηλότερη από αυτή που χρησιμοποιείται στην ηλεκτροφόρηση χαρτιού. Το συνήθως χρησιμοποιούμενο pH 8,6BΤο διαιτητικό ρυθμιστικό διάλυμα επιλέγεται τυπικά εντός της περιοχής από 0,05 mol/L έως 0,09 mol/L. Κατά την επιλογή της συγκέντρωσης, γίνεται ένας προκαταρκτικός προσδιορισμός. Για παράδειγμα, εάν το μήκος της λωρίδας μεμβράνης μεταξύ των ηλεκτροδίων στον θάλαμο ηλεκτροφόρησης είναι 8-10 cm, απαιτείται τάση 25 V ανά εκατοστό μήκους μεμβράνης και η ένταση ρεύματος πρέπει να είναι 0,4-0,5 mA ανά εκατοστό πλάτους μεμβράνης. Εάν αυτές οι τιμές δεν επιτευχθούν ή δεν ξεπεραστούν κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης, η συγκέντρωση του ρυθμιστικού διαλύματος θα πρέπει να αυξηθεί ή να αραιωθεί.
Μια υπερβολικά χαμηλή συγκέντρωση ρυθμιστικού διαλύματος θα έχει ως αποτέλεσμα μια γρήγορη κίνηση των ζωνών και μια αύξηση στο πλάτος της ζώνης. Από την άλλη πλευρά, μια υπερβολικά υψηλή συγκέντρωση ρυθμιστικού διαλύματος θα επιβραδύνει τη μετανάστευση της ζώνης, καθιστώντας δύσκολη τη διάκριση ορισμένων ζωνών διαχωρισμού.
Πρέπει να σημειωθεί ότι στην ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης, ένα σημαντικό μέρος του ρεύματος διοχετεύεται μέσω του δείγματος, το οποίο παράγει σημαντική ποσότητα θερμότητας. Μερικές φορές, η επιλεγμένη συγκέντρωση ρυθμιστικού διαλύματος μπορεί να θεωρηθεί κατάλληλη. Ωστόσο, υπό συνθήκες αυξημένης θερμοκρασίας περιβάλλοντος ή όταν χρησιμοποιείται υψηλότερη τάση, η εξάτμιση του νερού λόγω της θερμότητας μπορεί να ενταθεί, με αποτέλεσμα υπερβολικά υψηλή συγκέντρωση ρυθμιστικού διαλύματος και ακόμη και ξήρανση της μεμβράνης.
Όγκος δείγματος
Στην ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης, η ποσότητα του όγκου του δείγματος προσδιορίζεται από διάφορους παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των συνθηκών ηλεκτροφόρησης, των ιδιοτήτων του ίδιου του δείγματος, των μεθόδων χρώσης και των τεχνικών ανίχνευσης. Ως γενική αρχή, όσο πιο ευαίσθητη είναι η μέθοδος ανίχνευσης, τόσο μικρότερος μπορεί να είναι ο όγκος του δείγματος, κάτι που είναι πλεονεκτικό για τον διαχωρισμό. Εάν ο όγκος του δείγματος είναι υπερβολικός, τα σχέδια ηλεκτροφορητικού διαχωρισμού μπορεί να μην είναι καθαρά και η χρώση μπορεί επίσης να είναι χρονοβόρα. Ωστόσο, κατά την ποσοτική ανάλυση των διαχωρισμένων χρωματισμένων λωρίδων χρησιμοποιώντας χρωματομετρικές μεθόδους ανίχνευσης έκλουσης, ο όγκος του δείγματος δεν πρέπει να είναι πολύ μικρός, καθώς μπορεί να οδηγήσει σε χαμηλότερες τιμές απορρόφησης για ορισμένα συστατικά, οδηγώντας σε υψηλότερα σφάλματα στον υπολογισμό του περιεχομένου τους. Σε τέτοιες περιπτώσεις, ο όγκος του δείγματος θα πρέπει να αυξάνεται κατάλληλα.
Συνήθως, ο όγκος του δείγματος που προστίθεται σε κάθε εκατοστό της γραμμής εφαρμογής του δείγματος κυμαίνεται από 0,1 έως 5 μL, που ισοδυναμεί με ποσότητα δείγματος από 5 έως 1000 μg. Για παράδειγμα, σε ανάλυση ρουτίνας ηλεκτροφόρησης πρωτεΐνης ορού, ο όγκος του δείγματος που προστίθεται σε κάθε εκατοστό της γραμμής εφαρμογής γενικά δεν υπερβαίνει το 1 μL, που ισοδυναμεί με 60 έως 80 μg πρωτεΐνης. Ωστόσο, όταν αναλύονται λιποπρωτεΐνες ή γλυκοπρωτεΐνες χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο ηλεκτροφόρησης, ο όγκος του δείγματος πρέπει να αυξηθεί αντίστοιχα.
Συμπερασματικά, ο καταλληλότερος όγκος δείγματος θα πρέπει να επιλεγεί βάσει συγκεκριμένων συνθηκών μέσω μιας σειράς προκαταρκτικών πειραμάτων.
Επιλογή διαλύματος χρώσης
Οι διαχωρισμένες ζώνες στην ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης συνήθως χρωματίζονται πριν από την ανίχνευση. Διαφορετικά συστατικά δείγματος απαιτούν διαφορετικές μεθόδους χρώσης και οι μέθοδοι χρώσης που είναι κατάλληλες για ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης μπορεί να μην είναι πλήρως εφαρμόσιμες στο διηθητικό χαρτί.
Υπάρχουν τρεις βασικές αρχές για την επιλογή του διαλύματος χρώσηςμεμβράνη οξικής κυτταρίνης. Πρώτα,Οι υδατοδιαλυτές βαφές θα πρέπει να προτιμώνται έναντι των αλκοολοδιαλυτών για να αποφευχθεί η συρρίκνωση και η παραμόρφωση της μεμβράνης που προκαλείται από το διάλυμα χρώσης των τελευταίων. Μετά τη χρώση, είναι σημαντικό να ξεπλύνετε τη μεμβράνη με νερό και να ελαχιστοποιήσετε τη διάρκεια της χρώσης. Διαφορετικά, η μεμβράνη μπορεί να κυρτωθεί ή να συρρικνωθεί, κάτι που θα επηρεάσει την επακόλουθη ανίχνευση.
Δεύτερον, είναι προτιμότερο να επιλέγονται βαφές με ισχυρή συγγένεια χρώσης για το δείγμα. Στην ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης των πρωτεϊνών ορού, το amino black 10B χρησιμοποιείται συνήθως λόγω της ισχυρής συγγένειας χρώσης για διάφορα συστατικά πρωτεΐνης ορού και της σταθερότητάς του.
Τρίτον, θα πρέπει να επιλέγονται αξιόπιστες ποιοτικές βαφές. Ορισμένες βαφές, παρόλο που έχουν το ίδιο όνομα, μπορεί να περιέχουν ακαθαρσίες που έχουν ως αποτέλεσμα ένα ιδιαίτερα σκούρο φόντο μετά τη χρώση. Αυτό μπορεί ακόμη και να θολώσει τις αρχικά καλά διαχωρισμένες ζώνες, καθιστώντας τους δύσκολο να διακριθούν.
Τέλος, η επιλογή της συγκέντρωσης του διαλύματος χρώσης είναι σημαντική. Θεωρητικά, μπορεί να φαίνεται ότι μια υψηλότερη συγκέντρωση διαλύματος χρώσης θα οδηγούσε σε πιο ενδελεχή χρώση των συστατικών του δείγματος και καλύτερα αποτελέσματα χρώσης. Ωστόσο, αυτό δεν ισχύει. Η συγγένεια δέσμευσης μεταξύ των συστατικών του δείγματος και της βαφής έχει ένα ορισμένο όριο, το οποίο δεν αυξάνεται με την αύξηση της συγκέντρωσης του διαλύματος χρώσης. Αντίθετα, μια υπερβολικά υψηλή συγκέντρωση διαλύματος χρώσης όχι μόνο σπαταλά τη βαφή αλλά και καθιστά δύσκολη την επίτευξη καθαρού φόντου. Επιπλέον, όταν η ένταση του χρώματος φτάσει σε μια ορισμένη μέγιστη τιμή, η καμπύλη απορρόφησης της βαφής δεν ακολουθεί γραμμική σχέση, ειδικά σε ποσοτικές μετρήσεις. Στην ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης, η συγκέντρωση του διαλύματος χρώσης είναι γενικά χαμηλότερη από αυτή που χρησιμοποιείται στην ηλεκτροφόρηση χαρτιού.
Λεπτομέρειες για τη βιοτεχνολογία Beijing Liuyi's μεμβράνη οξικής κυτταρίνηςδεξαμενή ηλεκτροφόρησης και η εφαρμογή ηλεκτροφόρησης, επισκεφθείτε εδώ:
μεγάλοΠείραμα διαχωρισμού πρωτεΐνης ορού με μεμβράνη οξικής κυτταρίνης
μεγάλοΗλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης
Εάν έχετε οποιοδήποτε σχέδιο αγοράς για τα προϊόντα μας, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Μπορείτε να μας στείλετε μήνυμα στο email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο], ή καλέστε μας στο +86 15810650221 ή προσθέστε το Whatsapp +86 15810650221 ή το Wechat: 15810650221.
Αναφορά:Ηλεκτροφόρηση (Δεύτερη έκδοση) του κ. Λι
Ώρα δημοσίευσης: Ιουν-06-2023