Προετοιμασία τζελ αγαρόζης για ηλεκτροφόρηση

Παρασκευή Gel Agarose για Ηλεκτροφόρηση

Σημείωση: Να φοράτε πάντα γάντια μιας χρήσης!

Οδηγίες βήμα προς βήμα

Ζύγιση σκόνης αγαρόζης:uδείτε χαρτί ζύγισης και ηλεκτρονικό ζυγό για μέτρηση 0,3 g σκόνης αγαρόζης (με βάση ένα σύστημα 30 ml).

Προετοιμασία ρυθμιστικού διαλύματος TBST:pπαρασκευάστε 30 ml ρυθμιστικού διαλύματος 1x TBST σε φιάλη Erlenmeyer των 100 ml.

Διάλυση σκόνης αγαρόζης:pρίχνουμε τη σκόνη αγαρόζης στο ρυθμιστικό διάλυμα TBST και ανακινούμε καλά.Βάλτε τα μέσασε φούρνο μικροκυμάτων και ζεσταίνουμε (συνήθως για 50 δευτερόλεπτα, καλυμμένο με αλουμινόχαρτο) μέχρι να διαλυθεί τελείως.

Ψύξη και προσθήκη νουκλεάσης:uΒγάλτε τα γάντια για να αφαιρέσετε το μείγμα από τον φούρνο μικροκυμάτων και αφήστε το να κρυώσει ελαφρώς σε κρύο νερό μέχρι να ζεσταθεί (περίπου 60°C). Προσθέστε 2 μl νουκλεάσης (υποκατάστατο Eb) ενώ ανακινείτε για να αναμειχθεί καλά.

Προετοιμασία του καλουπιού gel:

• Cαδυνατίστε και στεγνώστε τοδίσκος γέλης και συσκευή χύτευσης γέληςτης δεξαμενής ηλεκτροφόρησης.
•  Pδαντέλα το τζελδίσκοςστην εσωτερική δεξαμενή και εισάγετε τη χτένα σε σταθερή θέση.
• Ανακατεύουμε το διάλυμα γέλης αγαρόζης, που έχει ψυχθεί στους 65°C περίπου, και το ρίχνουμε προσεκτικά στοδίσκος τζελστοσυσκευή χύτευσης γέλης, απλώνοντάς το σιγά σιγά μέχρι να σχηματιστεί μια ομοιόμορφη στρώση τζελ στο γυάλινο πιάτο.
• Αφήστε το να καθίσει σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι να στερεοποιηθεί τελείως η γέλη.
• Αφαιρέστε απαλά τη χτένα κάθετα και αφαιρέστε την ταινία.
• Τοποθετήστε το τζελδίσκοςστη δεξαμενή ηλεκτροφόρησης.

Σημαντικό: Βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχουν φυσαλίδες αέρα στην περιοχή των δοντιών της χτένας. Η επιφάνεια του υγρού πρέπει να είναι λεία χωρίς κυματισμούς.

Τρέξιμο του Gel

Φόρτωση του Gel

Αφού στερεοποιηθεί το πήκτωμα, τοποθετήστε το στη δεξαμενή ηλεκτροφόρησης και ρίξτε το ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης μέχρι να βυθιστεί το πήκτωμα.

Προετοιμασία δειγμάτων

• Πάρτε τον δείκτη και το buffer φόρτωσης από το ψυγείο.
• Προσθέστε 6µl ρυθμιστικού διαλύματος φόρτωσης στα δείγματα και ανακατέψτε καλά.
• Χρησιμοποιώντας μια μικροσιφώνια, φορτώστε αργά τα δείγματα στα μεγάλα φρεάτια της γέλης (προσέξτε να μην τρυπήσετε τη γέλη και μην διανείμετε ολόκληρο τον όγκο για να αποφύγετε τις φυσαλίδες αέρα).
• Τοποθετήστε το δείκτη σε οποιοδήποτε από τα μικρά φρεάτια (θυμηθείτε τη θέση του).

Έναρξη Ηλεκτροφόρησης

• Καλύψτε τη δεξαμενή ηλεκτροφόρησης και ξεκινήστε την ηλεκτροφόρηση αμέσως μετά τη φόρτωση της γέλης.
• Ρυθμίστε την τάση στα 60-100V. Τα δείγματα θα μεταναστεύσουν από το αρνητικό ηλεκτρόδιο (μαύρο) στο θετικό ηλεκτρόδιο (κόκκινο).
• Η υψηλότερη τάση μειώνει την αποτελεσματική περιοχή διαχωρισμού της γέλης αγαρόζης.
• Σταματήστε την ηλεκτροφόρηση όταν η βαφή μπλε βρωμοφαινόλης φτάσει περίπου το 1 cm από το κάτω άκρο της πλάκας γέλης.

Παρατήρηση Αποτελεσμάτων

Αφού χωρίσετε τις ταινίες, σταματήστε την ηλεκτροφόρηση, αφαιρέστε το τζελ και εντοπίστε το και φωτογραφίστε το απευθείας.

Χρησιμοποιήστε ένα σύστημα απεικόνισης γέλης για να φωτογραφίσετε και να παρατηρήσετε τις ταινίες (ελέγξτε αν υπάρχουν ταινίες για τον δείκτη ή τα δείγματα).

Αφού λάβετε τον χάρτη ζώνης γέλης, βρείτε τον δείκτη. Με βάση τον δείκτη, μπορείτε να προσδιορίσετε τις ζώνες-στόχους!

Η Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) κατασκευάζει προϊόντα ηλεκτροφόρησης για περισσότερα από 50 χρόνια. Παρουσιάζουμε τα οριζόντια μας συστήματα ηλεκτροφόρησης εδώ γιαγέλη αγαρόζηςηλεκτροφόρηση.Επιλέγωοριζόντια συστήματα ηλεκτροφόρησηςαπό το Beijing liuyi για το πείραμά σας ηλεκτροφόρησης γέλης για να βοηθήσετε την έρευνά σας στον κλάδο της βιοτεχνολογίας.

Προσφέρουμε διαφορετικά μοντέλα οριζόντιων δεξαμενών ηλεκτροφόρησης για χύτευση και λειτουργία μικρώναγαρόζητζελ σε μεγάλοαγαρόζητζελ

Οδηγός επιλογής για μονάδα ηλεκτροφόρησης οριζόντιας βυθισμένης γέλης

Η Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ειδικεύεται στην κατασκευή οργάνων ηλεκτροφόρησης για περισσότερα από 50 χρόνια με τη δική μας επαγγελματική τεχνική ομάδα και κέντρο Ε&Α. Διαθέτουμε αξιόπιστη και πλήρη γραμμή παραγωγής από το σχεδιασμό έως την επιθεώρηση και την αποθήκη, καθώς και υποστήριξη μάρκετινγκ. Τα κύρια προϊόντα μας είναι Κύτταρο ηλεκτροφόρησης (δεξαμενή/θάλαμος), Τροφοδοτικό ηλεκτροφόρησης, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System κ.λπ. Παρέχουμε επίσης τα εργαστηριακά όργανα όπως όργανο PCR, μίκτη vortex και φυγόκεντρο για εργαστήριο.

Εάν έχετε οποιοδήποτε σχέδιο αγοράς για τα προϊόντα μας, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Μπορείτε να μας στείλετε μήνυμα στο email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο], ή καλέστε μας στο +86 15810650221 ή προσθέστε το Whatsapp +86 15810650221 ή το Wechat: 15810650221.

Σαρώστε τον κωδικό QR για να τον προσθέσετε στο Whatsapp ή στο WeChat.