Εισαγωγή
Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια θεμελιώδης τεχνική στη μοριακή βιολογία, που χρησιμοποιείται ευρέως για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών, νουκλεϊκών οξέων και άλλων μακρομορίων. Ο σωστός έλεγχος του όγκου του δείγματος, της τάσης και του χρόνου ηλεκτροφόρησης είναι ζωτικής σημασίας για την επίτευξη ακριβών και αναπαραγώγιμων αποτελεσμάτων.Ο συνεργάτης μας στο εργαστήριο προσφέρειβέλτιστες πρακτικές για τη διαχείριση αυτών των παραμέτρων κατά την ηλεκτροφόρηση γέλης SDS-PAGE.
Προϊόντα ηλεκτροφόρησης γέλης Beijing Liuyi Biotechnology
Όγκος δείγματος: Εξασφάλιση συνέπειας
Όταν εκτελείτε ηλεκτροφόρηση SDS-PAGE, ο όγκος του δείγματος είναι ένας βασικός παράγοντας που μπορεί να επηρεάσει σημαντικά την ανάλυση των αποτελεσμάτων σας. Γενικά συνιστάται η φόρτωση 10 µL ολικής πρωτεΐνης ανά φρεάτιο. Για να διασφαλιστεί η συνοχή και να αποτραπεί η διάχυση του δείγματος μεταξύ των παρακείμενων φρεατίων, είναι σημαντικό να τοποθετήσετε ίσο όγκο 1x buffer φόρτωσης σε οποιαδήποτε άδεια φρεάτια. Αυτή η προφύλαξη βοηθά στην αποφυγή της εξάπλωσης των δειγμάτων σε γειτονικές λωρίδες, η οποία μπορεί να συμβεί εάν το φρεάτιο μείνει άδειο.
Πριν φορτώσετε τα δείγματά σας, ξεκινήστε πάντα προσθέτοντας ένα δείκτη μοριακού βάρους σε ένα φρεάτιο. Αυτό επιτρέπει την εύκολη αναγνώριση των μεγεθών πρωτεΐνης μετά την ηλεκτροφόρηση.
Έλεγχος τάσης: Εξισορρόπηση ταχύτητας και ανάλυσης
Η τάση που εφαρμόζεται κατά την ηλεκτροφόρηση επηρεάζει άμεσα τόσο την ταχύτητα με την οποία τα δείγματα μεταναστεύουν μέσω της γέλης όσο και την ανάλυση του διαχωρισμού. Για το SDS-PAGE, συνιστάται να ξεκινήσετε με χαμηλή τάση περίπου 80V. Αυτή η αρχική χαμηλή τάση επιτρέπει στα δείγματα να μετακινούνται αργά και ομοιόμορφα, συγκεντρώνοντάς τα σε μια αιχμηρή ζώνη καθώς εισέρχονται στο διαχωριστικό πήκτωμα.
Μόλις τα δείγματα εισέλθουν πλήρως στη διαχωριστική γέλη, η τάση μπορεί να αυξηθεί στα 120 V. Αυτή η υψηλότερη τάση επιταχύνει τη μετανάστευση, διασφαλίζοντας ότι οι πρωτεΐνες διαχωρίζονται αποτελεσματικά ανάλογα με το μοριακό τους βάρος. Είναι απαραίτητο να παρακολουθείται η πρόοδος του μετώπου βαφής μπλε βρωμοφαινόλης, το οποίο υποδηλώνει την ολοκλήρωση της ηλεκτροφόρησης. Για γέλες με συγκέντρωση 10-12%, 80-90 λεπτά είναι τυπικά επαρκή. Ωστόσο, για τζελ 15%, ίσως χρειαστεί να παρατείνετε ελαφρώς τον χρόνο λειτουργίας.
Διαχείριση χρόνου: Γνωρίζοντας πότε πρέπει να σταματήσετε
Ο χρόνος είναι ένας άλλος κρίσιμος παράγοντας στην ηλεκτροφόρηση γέλης. Η λειτουργία του τζελ για πολύ μεγάλο ή πολύ σύντομο χρονικό διάστημα μπορεί να οδηγήσει σε μη βέλτιστο διαχωρισμό. Η μετανάστευση της βαφής μπλε βρωμοφαινόλης είναι ένας χρήσιμος δείκτης: όταν φτάσει στο κάτω μέρος της γέλης, συνήθως είναι ώρα να σταματήσει το τρέξιμο. Για τυπικά πηκτώματα, όπως 10-12%, μια διάρκεια ηλεκτροφόρησης περίπου 80-90 λεπτών είναι τυπικά επαρκής. Για γέλες υψηλότερου ποσοστού, όπως 15%, ο χρόνος εκτέλεσης θα πρέπει να παραταθεί για να διασφαλιστεί ο πλήρης διαχωρισμός των πρωτεϊνών.
Διαχείριση buffer: Επαναχρησιμοποίηση και προετοιμασία buffer
Το ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης μπορεί να επαναχρησιμοποιηθεί 1-2 φορές, ανάλογα με τις ειδικές συνθήκες του εργαστηρίου σας. Ωστόσο, για βέλτιστα αποτελέσματα, συνιστάται η παρασκευή φρέσκου ρυθμιστικού διαλύματος 10x και η αραίωση του λίγο πριν τη χρήση. Αυτό διασφαλίζει ότι το buffer διατηρεί την αποτελεσματικότητά του, οδηγώντας σε πιο αξιόπιστα αποτελέσματα ηλεκτροφόρησης.
Προϊόντα ηλεκτροφόρησης γέλης Beijing Liuyi Biotechnology
Με τον προσεκτικό έλεγχο του όγκου του δείγματος, της τάσης και του χρόνου ηλεκτροφόρησης, μπορείτε να βελτιώσετε σημαντικά την ακρίβεια και την αναπαραγωγιμότητα των αποτελεσμάτων ηλεκτροφόρησης γέλης. Η εφαρμογή αυτών των βέλτιστων πρακτικών στην εργαστηριακή σας εργασία θα σας βοηθήσει να επιτύχετε σαφέστερες και πιο ευδιάκριτες ζώνες, οδηγώντας σε καλύτερα δεδομένα για ανάλυση κατάντη.
Εάν έχετε περισσότερες καλές μεθόδους για τη βελτιστοποίηση του πειράματος ηλεκτροφόρησης γέλης, καλώς ήλθατε να συζητήσετε μαζί μας!
Η Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ειδικεύεται στην κατασκευή οργάνων ηλεκτροφόρησης για περισσότερα από 50 χρόνια με τη δική μας επαγγελματική τεχνική ομάδα και κέντρο Ε&Α. Διαθέτουμε αξιόπιστη και πλήρη γραμμή παραγωγής από το σχεδιασμό έως την επιθεώρηση και την αποθήκη, καθώς και υποστήριξη μάρκετινγκ. Τα κύρια προϊόντα μας είναι Κύτταρο ηλεκτροφόρησης (δεξαμενή/θάλαμος), Τροφοδοτικό ηλεκτροφόρησης, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System κ.λπ. Παρέχουμε επίσης τα εργαστηριακά όργανα όπως όργανο PCR, μίκτη vortex και φυγόκεντρο για εργαστήριο.
Εάν έχετε οποιοδήποτε σχέδιο αγοράς για τα προϊόντα μας, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Μπορείτε να μας στείλετε μήνυμα στο email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο], ή καλέστε μας στο +86 15810650221 ή προσθέστε το Whatsapp +86 15810650221 ή το Wechat: 15810650221.
Σαρώστε τον κωδικό QR για να τον προσθέσετε στο Whatsapp ή στο WeChat.
Ώρα ανάρτησης: 20 Αυγούστου 2024