Πείραμα διαχωρισμού πρωτεΐνης ορού με ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης

Αρχή

Η ηλεκτροφόρηση μεμβράνης οξικής κυτταρίνης είναι μια μέθοδος ηλεκτροφόρησης που χρησιμοποιεί ένα φιλμ οξικής κυτταρίνης ως υποστήριξη. Το φαινόμενο κατά το οποίο φορτισμένα σωματίδια κινούνται προς το αντίθετο ηλεκτρόδιο υπό τη δράση ηλεκτρικού πεδίου ονομάζεται ηλεκτροφόρηση. Δεδομένου ότι κάθε πρωτεΐνη έχει ένα συγκεκριμένο ισοηλεκτρικό σημείο, εάν μια πρωτεΐνη τοποθετηθεί σε διάλυμα με pH χαμηλότερο από το ισοηλεκτρικό της σημείο, η πρωτεΐνη θα φορτιστεί θετικά και θα κινηθεί προς το αρνητικό ηλεκτρόδιο. Αντίθετα, κινείται στον θετικό πόλο. Επειδή η ταχύτητα των μορίων πρωτεΐνης που κινούνται σε ένα ηλεκτρικό πεδίο σχετίζεται με το φορτίο τους, το σχήμα και το μέγεθος των μορίων, διαφορετικές πρωτεΐνες μπορούν να διαχωριστούν με ηλεκτροφόρηση. Ο ορός περιέχει μια ποικιλία πρωτεϊνών, οι οποίες έχουν όλες ισοηλεκτρικά σημεία σε pH 7,5 ή λιγότερο. Όταν ο ορός τοποθετείται σε ρυθμιστικό διάλυμα pH 8,6 για την εκτέλεση ηλεκτροφόρησης, όλες οι πρωτεΐνες του ορού φορτίζονται αρνητικά και θα κινηθούν προς τη θετική πλευρά του ηλεκτρικού πεδίου. Δεδομένου ότι διάφορες πρωτεΐνες ορού έχουν διαφορετικά φορτία στο ίδιο pH, τα μοριακά σωματίδια είναι διαφορετικά σε μέγεθος, και επομένως η ταχύτητα μετανάστευσης είναι διαφορετική και διαχωρίζονται με ηλεκτροφόρηση. Τα ισοηλεκτρικά σημεία και τα μοριακά βάρη των πρωτεϊνών ορού φαίνονται στον παρακάτω πίνακα:

Το πείραμα είναι ο διαχωρισμός διαφορετικών πρωτεϊνών στον ορό αίματος με μεμβράνη οξικής κυτταρίνης (συντομογραφία CAM) ως μέσο υποστήριξης. Το CAM είναι ένα είδος αφρού λουστραριούeμεμβράνη με καλή στολή, και το πάχος είναι 0,1mm-1,5mm, το οποίο έχει μια ορισμένη απορρόφηση νερού.

Υλικά, όργανα και αντιδραστήρια για την ηλεκτροφόρηση CAM

Δείγματα:υγιής ανθρώπινος ορός αίματος

Οργανο:τροφοδοτικό DYY-6C, δεξαμενή ηλεκτροφόρησης DYCP-38C, ανώτερη φόρτωση δείγματος WD-9404

Τα αντιδραστήρια

1) μεμβράνη οξικής κυτταρίνης 7Χ9εκ

2) Ρυθμιστικό διάλυμα βαρβιτόλης PH 8,6 (ιονική ισχύς 0,05-0,09, είναι 0,06 ώρα): πάρτε 1,84 g διαιθυλοβαρβιτουρικό οξύ και μετά πάρτε 1,03 g διαιθυλ νάτριο πεντοβαρβιτάλη, προσθέστε λίγο απεσταγμένο νερό για να θερμανθεί για να διαλυθεί και φτιάξτε έως 1000 ml;

3) Λεκέ: Ponceau S 0,2g, Trichloroacetic 3g, προσθέστε 100ml απεσταγμένο νερό.

4) TBS/T ή PBS/T: 45 ml 95% αιθανόλη, 5 ml παγόμορφο οξικό οξύ, προσθέστε 50 ml απεσταγμένο νερό.

5) Διάλυμα καθαρισμού: 70 ml άνυδρη αιθανόλη, 30 ml παγόμορφο οξικό οξύ.

Πείραμα Method

1) Προετοιμάστε τη μεμβράνη: Βυθίστε τη μεμβράνη στο ρυθμιστικό διάλυμα βαρβιτόλης για 30 λεπτά-8 ώρες και αφαιρέστε την, αφαιρέστε το επιπλέον διάλυμα με απορροφητικό χαρτί.

2) Φόρτωση δειγμάτων: Διακρίνετε την τραχιά πλευρά και την λεία πλευρά της μεμβράνης και σημειώστε μια γραμμή σε απόσταση 1,5 cm από το επάνω άκρο στην τραχιά πλευρά. Φορτώστε τα δείγματα με ανώτερο εργαλείο φόρτωσης δειγμάτων στην τραχιά πλευρά. Σημείωση: Τα δείγματα πρέπει να τοποθετηθούν στην τραχιά πλευρά της μεμβράνης. Αφού τα δείγματα ορού εισχωρήσουν πλήρως στη μεμβράνη, γυρίστε τη μεμβράνη, βάλτε την τραχιά πλευρά (με δείγματα) με την όψη προς τα κάτω στη δεξαμενή και το άκρο με τα δείγματα τοποθετείται σε αρνητικό ηλεκτρόδιο.

3) Ηλεκτροφόρηση: Ανοίξτε το τροφοδοτικό, 0,4～Μεμβράνη 0,6m A/cm, ο χρόνος λειτουργίας είναι 30-45 λεπτά. Μετά την εκτέλεση της ηλεκτροφόρησης, απενεργοποιήστε το ρεύμα.

4) Βάλτε και καθαρίστε: Βγάλτε τη μεμβράνη από τη δεξαμενή και βυθίστεit στο διάλυμα βαφής για 5 λεπτά και, στη συνέχεια, καθαρίστε το στο διάλυμα καθαρισμού ξανά και ξανά για 3-4 φορές μέχρι το χρώμα του φόντου να είναι καθαρό. Οι πρωτεΐνες του ορού πρέπει να φαίνονται στις ζώνες, και κανονικά υπάρχουν πέντε ζώνες, από το επάνω άκρο της γραμμής που σημειώνεται, Λευκωματίνη, α1-γλουλίνη, α2-γλουλίνη, β-γλουλίνη, γ-γλουλίνη.

5) Συντήρηση: βάλτε την ξηρή ηλεκτροφόρησηζώνησε διάλυμα καθαρισμού για 10-15 λεπτά και μετά το βγάζετε και το κολλάτε σε καθαρό ποτήρι, αφού στεγνώσει θα γίνει διάφανη μεμβράνηζώνη.

ΠείραμαΑποτέλεσμα

Το αποτέλεσμα διαχωρισμού των δειγμάτων ορού είναι καλό και δεν υπάρχει φαινόμενο ουράς ταινίας. Η επαναληψιμότητα των αποτελεσμάτων ποικίλλει λόγω των διαδικασιών δοκιμής και των μεθόδων του πειραματιστή και η επαναληψιμότητα είναι υψηλή.

Σύναψη

Το σύστημα ταχείας κλινικής ανίχνευσης ηλεκτροφόρησης (Δεξαμενή ηλεκτροφόρησηςDYCP-38C,τροφοδοτικόDYY-6C και ανώτερη φόρτωση δείγματος WD-9404) που παράγονται από την εταιρεία μαςεταιρεία Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdπληροί τις πειραματικές απαιτήσεις,καιτα αποτελέσματα είναι αναπαραγώγιμα, απλά και γρήγορα, κατάλληλα γιαδιδασκαλίαέρευνα.

Beijing LiuyiΗ Biotechnology Co., Ltd ειδικεύεται στην κατασκευή προϊόντων ηλεκτροφόρησης για τη βιομηχανία βιοεπιστημών, η οποίαέχει περισσότερα από 50 χρόνια ιστορίας στην Κίνα και η εταιρεία μπορεί να παρέχει σταθερά και υψηλής ποιότητας προϊόντα σε όλο τον κόσμο. Μέσα από χρόνια ανάπτυξης, αξίζει την επιλογή σας!

Τώρα αναζητούμε συνεργάτες, τόσο η δεξαμενή ηλεκτροφόρησης OEM όσο και οι διανομείς είναι ευπρόσδεκτοι.

Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με εμάς, επικοινωνήστε μαζί μας μέσω email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο].