Η ηλεκτροφόρηση γέλης DNA είναι μια κοινή τεχνική μοριακής βιολογίας που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό και την ανάλυση θραυσμάτων DNA με βάση τα μεγέθη τους. Η διαδικασία περιλαμβάνει τη φόρτωση θραυσμάτων DNA διαφορετικού μεγέθους σε μια γέλη από αγαρόζη, έναν υδατάνθρακα που βρίσκεται στα κόκκινα φύκια.
Προετοιμασία και χύτευση της γέλης αγαρόζης
- Διαλύουμε την αγαρόζη σε κατάλληλη ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτροφόρησης. Η συγκέντρωση της γέλης προσδιορίζεται από την αναλογία μάζας προς όγκο, όπως 1 g αγαρόζης σε 100ml ρυθμιστικού διαλύματος για γέλη 1%.
- Ζεστάνετε το μείγμα σε φούρνο μικροκυμάτων, περιστρέφοντας το δοχείο για να διασφαλίσετε την πλήρη διάλυση της αγαρόζης.
- Προσθέστε βρωμιούχο αιθίδιο στο διάλυμα γέλης σε τελική συγκέντρωση 0,5mg/ ml. Το βρωμιούχο αιθίδιο παρεμβάλλεται μεταξύ γειτονικών ζευγών βάσεων DNA και εκπέμπει πορτοκαλί φθορισμό υπό υπεριώδες φως. Σημειώστε ότι το βρωμιούχο αιθίδιο είναι καρκινογόνο, επομένως ο χειρισμός του απαιτεί κατάλληλα μέτρα ασφαλείας όπως η χρήση γαντιών.
- Ψύξτε το διάλυμα γέλης σε λουτρό νερού για να αποτρέψετε τη στρέβλωση του δίσκου γέλης λόγω υψηλών θερμοκρασιών.
- Τοποθετήστε μια χτένα στο διάλυμα γέλης για να σχηματιστούν φρεάτια δείγματος. Επιλέξτε χτένες κατάλληλες για την ποσότητα δείγματος DNA που θα φορτώσετε. Ρίξτε το διάλυμα γέλης αγαρόζης μέσα στοδίσκος τζελκαι αφήστε το να στερεοποιηθεί σε θερμοκρασία δωματίου.
- Μόλις στερεοποιηθεί το τζελ, αφαιρέστε τη χτένα. Εάν δεν πρόκειται να χρησιμοποιήσετε το τζελ αμέσως, τυλίξτε το σε πλαστική μεμβράνη και αποθηκεύστε το στους 4℃ μέχρι να το χρειαστείτε.
Προετοιμασία και λειτουργία του τζελ
Πριν ξεκινήσετε την ηλεκτροφόρηση, αναμίξτε το δείγμα DNA με ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης. Το buffer φόρτωσης είναι συνήθως έξι φορές πιο συγκεντρωμένο και βοηθά το δείγμα να βυθιστεί στον πυθμένα των φρεατίων και να παρακολουθεί την κίνηση κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης.
Ρυθμίστε την παροχή ρεύματος στην καθορισμένη τάση.
Προσθέστε αρκετό ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης στη δεξαμενή γέλης για να καλύψετε την επιφάνεια της γέλης.Εξασφαλίζωτις σωστές συνδέσεις ηλεκτροδίων.
Φορτώστε το δείγμα DNA και τους δείκτες μοριακού βάρους στα φρεάτια γέλης.
Ανοίξτε το τροφοδοτικό για να ξεκινήσει η ηλεκτροφόρηση.
Παρατήρηση διαχωρισμένων θραυσμάτων DNA
Μετά την ηλεκτροφόρηση, κλείστε την παροχή ρεύματος και αφαιρέστε το τζελ.
Χρησιμοποιήστε μια πηγή φωτός UV για να φωτίσετε το τζελ. Τα θραύσματα DNA θα εμφανίζονται ως πορτοκαλί φθορίζουσες ζώνες.
Τεκμηριώστε την εικόνα γέλης για να αναλύσετε τα διαχωρισμένα θραύσματα DNA.
Μετά το πείραμα, διασφαλίστε τη σωστή απόρριψη της γέλης και του ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτροφόρησης, ακολουθώντας τις εργαστηριακές οδηγίες. Να φοράτε πάντα γάντια όταν χειρίζεστε τζελ και ρυθμιστικά διαλύματα που περιέχουν βρωμιούχο αιθίδιο για προστασία από την έκθεση σε αυτή την επικίνδυνη ουσία.
Η ηλεκτροφόρηση γέλης DNA χρησιμοποιείται ευρέως στη μοριακή βιολογία και τη γενετική έρευνα για την εκτίμηση των μεγεθών των μορίων DNA, τον διαχωρισμό θραυσμάτων DNA, την ανίχνευση γονιδιακών μεταλλάξεων και τη λήψη δακτυλικών αποτυπωμάτων DNA, μεταξύ άλλων εφαρμογών. Είναι μια απλή και αποτελεσματική πειραματική τεχνική που βοηθά στην κατανόηση της σύνθεσης και των χαρακτηριστικών των δειγμάτων DNA.
Η Beijing Liuyi Biotechnology Co.Ltd, επαγγελματίας κατασκευαστής που εστιάζει σε προϊόντα ηλεκτροφόρησης για πάνω από 50 χρόνια, προσφέρει μια σειρά δεξαμενών ηλεκτροφόρησης (θάλαμοι/κυψέλες) για ηλεκτροφόρηση γέλης, όπως οριζόντιες δεξαμενές ηλεκτροφόρησης (θάλαμοι/κυψέλες) γιαDNAηλεκτροφόρηση γέλης και κάθετες δεξαμενές ηλεκτροφόρησης (θάλαμοι/κυψέλες) για ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνικής γέλης. Εν τω μεταξύ, παρέχει επίσης διαφορετικούς τύπους τροφοδοσίας ηλεκτροφόρησης, αναλυτή σκούρου κιβωτίου ντουλαπιού και transilluminator UV. Μπορείτε να επιλέξετε τις δεξαμενές ηλεκτροφόρησης του Beijing Liuyi (θάλαμοι/κύτταρα) για να μετρήσετε το μοριακό βάρος του RNA και να διαχωρίσετε RNA διαφορετικών μεγεθών για το εργαστήριό σας.
Εδώ θα το κάνουμεσυνιστώένας τύπος μοντέλου οριζόντιας δεξαμενής ηλεκτροφόρησης (θάλαμος/κυψέλη).DYCP-31DN για να φτιάξετε και να τρέξετε το τζελ.
Αφού εκτελέσετε το gel, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε το μοντέλο του συστήματος εικόνας και ανάλυσης gelWD-9413Bνα παρατηρήσει, να αναλύσει και να τραβήξει φωτογραφίες για το τζελ. Η Liuyi Biotech προσφέρει επίσης UV transilluminator (UV Analyzer) για την παρατήρηση της γέλης. Διαθέτουμε μοντέλο UV transilluminator (UV Analyzer) τύπου μαύρου κουτιούWD-9403A,9403C,WD-9403F, φορητό μοντέλο UV transilluminator (UV Analyzer).WD-9403Bκαι χειρός UV transilluminator (UV Analyzer)WD-9403Eγια να διαλέξεις.
Η επωνυμία Beijing Liuyi έχει περισσότερα από 50 χρόνια ιστορίας στην Κίνα και η εταιρεία μπορεί να παρέχει σταθερά και υψηλής ποιότητας προϊόντα σε όλο τον κόσμο. Μέσα από χρόνια ανάπτυξης, αξίζει την επιλογή σας!
Τώρα αναζητούμε συνεργάτες, τόσο η δεξαμενή ηλεκτροφόρησης OEM όσο και οι διανομείς είναι ευπρόσδεκτοι.
Εάν έχετε οποιοδήποτε σχέδιο αγοράς για τα προϊόντα μας, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Μπορείτε να μας στείλετε μήνυμα στο email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο], ή καλέστε μας στο +86 15810650221 ή προσθέστε το Whatsapp +86 15810650221 ή το Wechat: 15810650221.
Ώρα δημοσίευσης: Αύγ-08-2023