Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια από τις κύριες μεθόδους που χρησιμοποιούνται στη μοριακή βιολογία για την ανάλυση του DNA. Αυτή η μέθοδος περιλαμβάνει τη μετανάστευση θραυσμάτων DNA μέσω μιας γέλης, όπου διαχωρίζονται με βάση το μέγεθος ή το σχήμα. Ωστόσο, έχετε αντιμετωπίσει ποτέ σφάλματα κατά τη διάρκεια των πειραμάτων ηλεκτροφόρησης, όπως αλειμμένες ταινίες στο πήκτωμα αγαρόζης ή χωρίς λωρίδες στο τζελ; Ποια θα μπορούσε να είναι η αιτία αυτών των σφαλμάτων;
Οι τεχνικοί μας συνόψισαν τα ζευγάρια αντιμετώπισης προβλημάτων εδώ για αναφορά σας.
1. Αλείψτε ταινίες σε τζελ αγαρόζης
●Το DNA υποβαθμίστηκε. Αποφύγετε τη μόλυνση με νουκλεάσες.
● Το ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης δεν είναι φρέσκο. Μετά από επανειλημμένη χρήση του ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτροφόρησης, η ιοντική ισχύς μειώνεται και η τιμή του pH αυξάνεται, έτσι η χωρητικότητα του ρυθμιστικού διαλύματος εξασθενεί, γεγονός που επηρεάζει το φαινόμενο ηλεκτροφόρησης. Συνιστάται η συχνή αντικατάσταση του ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτροφόρησης.
● Χρησιμοποιήθηκαν ακατάλληλες συνθήκες ηλεκτροφόρησης. Μην αφήνετε την τάση να υπερβαίνει τα 20 V/cm και διατηρείτε θερμοκρασία <30°C κατά την ηλεκτροφόρηση. Για την ηλεκτροφόρηση γιγαντιαίας αλυσίδας DNA, η θερμοκρασία πρέπει να είναι <15° C. Ελέγξτε ότι το ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης έχει αρκετή χωρητικότητα ρυθμιστικού διαλύματος.
● Φορτώθηκε πάρα πολύ DNA στο τζελ. Μειώστε την ποσότητα του DNA.
● Πάρα πολύ αλάτι στο DNA. Χρησιμοποιήστε καθίζηση αιθανόλης για να αφαιρέσετε τα πλεονάζοντα άλατα εκ των προτέρων.
● Το DNA ήταν μολυσμένο με πρωτεΐνη. Χρησιμοποιήστε εκχυλίσεις φαινόλης για να αφαιρέσετε πρωτεΐνες εκ των προτέρων.
● Το DNA μετουσιώθηκε. Μην θερμαίνετε πριν την ηλεκτροφόρηση. Αραιώστε το DNA σε ρυθμιστικό διάλυμα με 20 mM NaCl.
2. Ανωμαλίες μετανάστευση ζώνης DNA
● Επαναφορά της θέσης COS του θραύσματος λHind III. Θερμάνετε το DNA για 5 λεπτά σε θερμοκρασία 65° C πριν από την ηλεκτροφόρηση και μετά ψύξτε το σε μονάδα πάγου για 5 λεπτά.
● Χρησιμοποιήθηκαν ακατάλληλες συνθήκες ηλεκτροφόρησης. Μην αφήνετε την τάση να υπερβαίνει τα 20 V/cm και διατηρείτε θερμοκρασία <30°C κατά την ηλεκτροφόρηση. Ελέγξτε ότι το buffer ηλεκτροφόρησης έχει αρκετή χωρητικότητα buffer.
● Το DNA μετουσιώθηκε. Μην θερμαίνετε πριν την ηλεκτροφόρηση. Αραιώστε το DNA σε ρυθμιστικό διάλυμα με 20 mM NaCl.
3. Αχνές ή καθόλου ζώνες DNA σε γέλη αγαρόζης
● Υπήρχε ανεπαρκής ποσότητα ή συγκέντρωση DNA που φορτώθηκε στο πήκτωμα. Αυξήστε την ποσότητα του DNA. Η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου είναι ελαφρώς πιο ευαίσθητη από την ηλεκτροφόρηση αγαρόζης και η φόρτωση του δείγματος μπορεί να μειωθεί κατάλληλα.
● Το DNA υποβαθμίστηκε. Αποφύγετε τη μόλυνση με νουκλεάσες.
● Το DNA ηλεκτροφορήθηκε από το πήκτωμα. Ηλεκτροφορήστε το τζελ για λιγότερο χρόνο, χρησιμοποιήστε χαμηλότερη τάση ή χρησιμοποιήστε υψηλότερο ποσοστό γέλης.
● Ακατάλληλη πηγή φωτός W χρησιμοποιήθηκε για την απεικόνιση DNA που έχει χρωματιστεί με βρωμιούχο αιθίδιο. Χρησιμοποιήστε ένα φως μικρού μήκους κύματος (254 nm) W για μεγαλύτερη ευαισθησία.
4. Λείπουν ζώνες DNA
●Το μικρού μεγέθους DNA ηλεκτροφορήθηκε από το πήκτωμα. Ηλεκτροφορήστε το τζελ για λιγότερο χρόνο, χρησιμοποιήστε χαμηλότερη τάση ή χρησιμοποιήστε υψηλότερο ποσοστό γέλης.
● Δύσκολη η διάκριση των ζωνών DNA παρόμοιων μοριακών. Αυξήστε το χρόνο ηλεκτροφόρησης και ελέγξτε τη συγκέντρωσητου τζελ για να βεβαιωθείτε ότι το ποσοστό της γέλης θα χρησιμοποιηθεί σωστά.
● Το DNA μετουσιώθηκε. Μην θερμαίνετε πριν την ηλεκτροφόρηση. Αραιώστε το DNA σε ρυθμιστικό διάλυμα με 20 mM NaCl.
● Οι κλώνοι του DNA είναι τεράστιοι και η συμβατική ηλεκτροφόρηση γέλης δεν είναι κατάλληλη. Ανάλυση σε ηλεκτροφόρηση παλμικής γέλης.Τι άλλα προβλήματα είχατε με την ηλεκτροφόρηση σε τζελ αγαρόζης; Θα ερευνήσουμε περισσότερο για οδηγούς στο μέλλον.
Η Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) είναι μια εξειδικευμένη εταιρεία που εστιάζει σε προϊόντα που σχετίζονται με την ηλεκτροφόρηση στην Κίνα. Η ιστορία του ξεκινά το 1970, όταν η Κίνα δεν είχε ακόμη εισέλθει στη μεταρρύθμιση και το άνοιγμα του χρόνου. Μέσα από την ανάπτυξη ετών, η Liuyi Bitotech έχει τη δική της μάρκα, η οποία είναι γνωστή ως Liuyi Brand στην εγχώρια αγορά για προϊόντα ηλεκτροφόρησης.
Η μάρκα Liuyi έχει περισσότερα από 50 χρόνια ιστορίας στην Κίνα και η εταιρεία μπορεί να παρέχει σταθερά και υψηλής ποιότητας προϊόντα σε όλο τον κόσμο. Μέσα από την ανάπτυξη ετών, αξίζει την επιλογή σας!
Οι οριζόντιες κυψέλες ηλεκτροφόρησης (δεξαμενές/θάλαμοι) της Liuyi Biotech είναι υψηλής ποιότητας με καλή εμφάνιση. Με διαφορετικά μεγέθη δίσκων gel, μπορούν να καλύψουν τις διαφορετικές πειραματικές σας απαιτήσεις. Έχουμε τη δική μας τεχνική ομάδα και εργοστάσιο. Από το σχεδιασμό μέχρι την κατασκευή, τις πρώτες ύλες έως τα βασικά μέρη, μπορούμε να ελέγξουμε όλη τη διαδικασία. Η σειρά DYCP 31 είναι για ηλεκτροφόρηση DNA, τα οποία είναι μοντέλαDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, καιDYCP-31E. Οι διαφορές μεταξύ τους είναι τα μεγέθη γέλης και η τιμή. Παρέχουμε πλήρη μεγέθη προϊόντων για τους πελάτες μας. Το μοντέλοDYCP-32Cμπορεί να κάνει το μεγαλύτερο τζελ 250mm*250mm.
Εν τω μεταξύ, προτείνουμε το τροφοδοτικό ηλεκτροφόρησηςDYY-6C,DYY-6DκαιDYY-10Cγια τις κυψέλες ηλεκτροφόρησης μας (δεξαμενές/θάλαμοι) σειρές DYCP-31 και 32.
Εάν θέλετε περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα προϊόντα, επισκεφθείτε αυτόν τον ιστότοπο για να λάβετε περισσότερα και καλώς ήρθατε να επικοινωνήσετε μαζί μας μέσω email για να μας ενημερώσετε τι θέλετε και να δείτε εάν μπορούμε να σας προσφέρουμε τις λύσεις.
Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με εμάς, επικοινωνήστε μαζί μας μέσω email[email προστατευμένο], [email προστατευμένο].
Ώρα δημοσίευσης: Μάιος-09-2022