Δοκιμασία Comet: Μια ευαίσθητη τεχνική για την ανίχνευση βλάβης στο DNA και την επιδιόρθωση

Το Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) είναι μια ευαίσθητη και γρήγορη τεχνική που χρησιμοποιείται κυρίως για την ανίχνευση βλάβης του DNA και την επιδιόρθωση σε μεμονωμένα κύτταρα. Το όνομα «Comet Assay» προέρχεται από το χαρακτηριστικό σχήμα που μοιάζει με κομήτη που εμφανίζεται στα αποτελέσματα: ο πυρήνας του κυττάρου σχηματίζει το «κεφάλι», ενώ τα κατεστραμμένα θραύσματα DNA μεταναστεύουν, δημιουργώντας μια «ουρά» που μοιάζει με κομήτη.

Αρχή

Η αρχή της δοκιμασίας Comet βασίζεται στη μετανάστευση θραυσμάτων DNA σε ένα ηλεκτρικό πεδίο. Το άθικτο DNA παραμένει μέσα στον πυρήνα του κυττάρου, ενώ το κατεστραμμένο ή κατακερματισμένο DNA μεταναστεύει προς την άνοδο, σχηματίζοντας την «ουρά» του κομήτη. Το μήκος και η ένταση της ουράς είναι ευθέως ανάλογα με την έκταση της βλάβης του DNA.

Διαδικασία

1. Παρασκευή κυττάρων: Τα προς δοκιμή κύτταρα αναμειγνύονται με αγαρόζη χαμηλού σημείου τήξης και απλώνονται σε πλακίδια μικροσκοπίου για να σχηματιστεί ένα ομοιόμορφο στρώμα.
2. Κυτταρική Λύση: Οι αντικειμενοφόρες πλάκες βυθίζονται σε διάλυμα λύσης για να αφαιρεθεί η κυτταρική μεμβράνη και η πυρηνική μεμβράνη, εκθέτοντας το DNA.
3. Ηλεκτροφόρηση: Οι αντικειμενοφόρες πλάκες τοποθετούνται σε θάλαμο ηλεκτροφόρησης υπό αλκαλικές ή ουδέτερες συνθήκες. Τα κατεστραμμένα θραύσματα DNA μεταναστεύουν προς το θετικό ηλεκτρόδιο υπό την επίδραση του ηλεκτρικού πεδίου.
4. Χρώση: Μετά την ηλεκτροφόρηση, οι αντικειμενοφόρες πλάκες χρωματίζονται με φθορίζουσα χρωστική ουσία (π.χ. βρωμιούχο αιθίδιο) για να οπτικοποιηθεί το DNA.
5. Μικροσκοπική Ανάλυση: Χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού ή εξειδικευμένο λογισμικό, αναλύονται τα σχήματα του κομήτη και μετρώνται παράμετροι όπως το μήκος και η ένταση της ουράς.

Εικόνα από το biorender

Ανάλυση Δεδομένων

Τα αποτελέσματα από τη δοκιμασία Comet αξιολογούνται με βάση πολλές βασικές παραμέτρους:

• Μήκος ουράς: Αντιπροσωπεύει την απόσταση που μεταναστεύει το DNA, υποδεικνύοντας την έκταση της βλάβης του DNA.
• Περιεχόμενο DNA ουράς: Το ποσοστό του DNA που μεταναστεύει στην ουρά, που χρησιμοποιείται συχνά ως ποσοτικό μέτρο της βλάβης του DNA.
• Olive Tail Moment (OTM): Συνδυάζει τόσο το μήκος της ουράς όσο και το περιεχόμενο DNA της ουράς για να παρέχει μια πιο ολοκληρωμένη μέτρηση της βλάβης του DNA.

Εφαρμογές

1. Μελέτες Γονοτοξικότητας: Η δοκιμασία Comet χρησιμοποιείται ευρέως για την αξιολόγηση των επιδράσεων των χημικών ουσιών, των φαρμάκων και της ακτινοβολίας στο κυτταρικό DNA, καθιστώντας το βασικό εργαλείο για τις δοκιμές γονοτοξικότητας.
2. Περιβαλλοντική Τοξικολογία: Βοηθά στην ανάλυση των επιπτώσεων των περιβαλλοντικών ρύπων στο DNA των οργανισμών, παρέχοντας πληροφορίες για την ασφάλεια των οικοσυστημάτων.
3. Ιατρική και Κλινική Έρευνα: Η δοκιμασία Comet χρησιμοποιείται στη μελέτη μηχανισμών επιδιόρθωσης DNA, καρκίνου και άλλων ασθενειών που σχετίζονται με το DNA. Αξιολογεί επίσης τον αντίκτυπο των θεραπειών για τον καρκίνο όπως η ακτινοθεραπεία και η χημειοθεραπεία στο DNA.
4. Επιστήμες Τροφίμων και Γεωργίας: Χρησιμοποιείται για την αξιολόγηση της ασφάλειας των φυτοφαρμάκων, των προσθέτων τροφίμων και άλλων ουσιών και για τη μελέτη των τοξικών τους επιδράσεων σε ζωικά μοντέλα.

Φόντα

• Υψηλή ευαισθησία: Ικανότητα ανίχνευσης χαμηλών επιπέδων βλάβης στο DNA.
• Απλή Λειτουργία: Η τεχνική είναι απλή, καθιστώντας την κατάλληλη για έλεγχο υψηλής απόδοσης.
• Ευρεία εφαρμογή: Μπορεί να εφαρμοστεί σε διάφορους τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των ζωικών και φυτικών κυττάρων.
• Προκλήσεις ποσοτικοποίησης: Ενώ παρέχει ποιοτικά δεδομένα για τη βλάβη του DNA, η ποσοτική ανάλυση βασίζεται σε μεγάλο βαθμό σε τεχνικές ανάλυσης λογισμικού και εικόνας.
• Πειραματικές Συνθήκες: Τα αποτελέσματα μπορούν να επηρεαστούν από παράγοντες όπως ο χρόνος ηλεκτροφόρησης και το pH, που απαιτούν προσεκτικό έλεγχο των πειραματικών συνθηκών.

Περιορισμοί

Το Comet Assay είναι ένα ανεκτίμητο εργαλείο στη βιοϊατρική έρευνα, την περιβαλλοντική επιστήμη και την ανάπτυξη φαρμάκων λόγω της ευελιξίας και της υψηλής ευαισθησίας του στον εντοπισμό βλάβης και επιδιόρθωσης του DNA. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)προσφέρει οριζόντιο θάλαμο ηλεκτροφόρησης για δοκιμασία κομήτη. Καλώς ήρθατε να επικοινωνήσετε μαζί μας για να συζητήσουμε σχετικά με τοComet Assayπρωτόκολλο.

Η Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ειδικεύεται στην κατασκευή οργάνων ηλεκτροφόρησης για περισσότερα από 50 χρόνια με τη δική μας επαγγελματική τεχνική ομάδα και κέντρο Ε&Α. Διαθέτουμε αξιόπιστη και πλήρη γραμμή παραγωγής από το σχεδιασμό έως την επιθεώρηση και την αποθήκη, καθώς και υποστήριξη μάρκετινγκ. Τα κύρια προϊόντα μας είναι Κύτταρο ηλεκτροφόρησης (δεξαμενή/θάλαμος), Τροφοδοτικό ηλεκτροφόρησης, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System κ.λπ. Παρέχουμε επίσης τα εργαστηριακά όργανα όπως όργανο PCR, μίκτη vortex και φυγόκεντρο για εργαστήριο.

Εάν έχετε οποιοδήποτε σχέδιο αγοράς για τα προϊόντα μας, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Μπορείτε να μας στείλετε μήνυμα στο email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο], ή καλέστε μας στο +86 15810650221 ή προσθέστε το Whatsapp +86 15810650221 ή το Wechat: 15810650221.

Σαρώστε τον κωδικό QR για να τον προσθέσετε στο Whatsapp ή στο WeChat.