Προετοιμασία δειγμάτων καιΦόρτωση
Λόγω της χρήσης ενός συνεχούς ρυθμιστικού συστήματος χωρίς στοίβαξη γέλης στις περισσότερες περιπτώσεις, τα δείγματα πρέπει να έχουν κατάλληλη συγκέντρωση και μικρό όγκο. Χρησιμοποιήστε ασταγονόμετρονα προσθέσετε αργά το δείγμα, με 5-10 μg ανά φρεάτιο, για να αποφευχθεί σημαντική μείωση της ανάλυσης. Οτανφόρτωση δείγματος, η παροχή ρεύματος πρέπει να είναι απενεργοποιημένη. Το δείγμα πρέπει να περιέχει μια ενδεικτική βαφή (0,025% μπλε ή πορτοκαλί βρωμοφαινόλης) και σακχαρόζη (10-15%) ή γλυκερίνη (5-10%) για να αυξηθεί η πυκνότητά του, να συμπυκνωθεί το δείγμα και να αποτραπεί η διάχυση. Ωστόσο, μερικές φορές η σακχαρόζη ή η γλυκερόλη μπορεί να προκαλέσουν ζώνες σχήματος U στα αποτελέσματα της ηλεκτροφόρησης, οι οποίες μπορούν να αποφευχθούν με τη χρήση 2,5% Ficoll (πολυβινυλοπυρρολιδόνη).
Ηλεκτροφόρηση
Η τάση για ηλεκτροφόρηση είναι 5-15 V/cm, γενικά γύρω στα 10 V/cm. Για τον διαχωρισμό μεγάλων μορίων, η τάση πρέπει να είναι χαμηλότερη, συνήθως να μην ξεπερνά τα 5 V/cm.
Χρώση
Η φθορίζουσα βαφή βρωμιούχου αιθιδίου (EB) χρησιμοποιείται συνήθως για χρώση για την παρατήρηση των ζωνών DNA σε γέλη αγαρόζης. Το EB μπορεί να εισαγάγει μεταξύ ζευγών βάσεων μορίων DNA, προκαλώντας τη σύνδεση του EB με το DNA. Η απορρόφηση υπεριώδους φωτός 260 nm από το DNA μεταφέρεται στο ΕΒ και το δεσμευμένο ΕΒ εκπέμπει φθορισμό στα 590 nm στην κόκκινη-πορτοκαλί περιοχή του φάσματος του ορατού φωτός. Η χρώση της γέλης σε διάλυμα MgSO4 1 mmol/L για 1 ώρα μπορεί να μειώσει τον φθορισμό υποβάθρου που προκαλείται από μη δεσμευμένο EB, διευκολύνοντας την ανίχνευση μικρών ποσοτήτων DNA.
Η βαφή EB έχει πολλά πλεονεκτήματα: είναι εύκολη στη χρήση, δεν διασπά τα νουκλεϊκά οξέα, έχει υψηλή ευαισθησία και μπορεί να χρωματίσει τόσο το DNA όσο και το RNA. Το EB μπορεί να προστεθεί στο δείγμα και να παρακολουθηθεί χρησιμοποιώντας απορρόφηση UV ανά πάσα στιγμή. Μετά τη χρώση, το EB μπορεί να αφαιρεθεί με εκχύλιση με n-βουτανόλη.
Ωστόσο, η βαφή EB είναι ένα ισχυρό μεταλλαξιογόνο και θα πρέπει να λαμβάνονται προφυλάξεις, όπως η χρήση γαντιών πολυαιθυλενίου, κατά τον χειρισμό. Το πορτοκαλί ακριδίνης είναι επίσης μια ευρέως χρησιμοποιούμενη βαφή επειδή μπορεί να διαφοροποιήσει τα μονόκλωνα και τα δίκλωνα νουκλεϊκά οξέα (DNA, RNA). Εμφανίζει πράσινο φθορισμό (530 nm) για δίκλωνα νουκλεϊκά οξέα και κόκκινο φθορισμό (640 nm) για μονόκλωνα νουκλεϊκά οξέα. Επιπλέον, άλλες χρωστικές όπως το μπλε του μεθυλενίου, το πράσινο του μεθυλενίου και η κινολίνη Β μπορούν να χρησιμοποιηθούν για χρώση.
Η Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ειδικεύεται στην κατασκευή οργάνων ηλεκτροφόρησης για περισσότερα από 50 χρόνια με τη δική μας επαγγελματική τεχνική ομάδα και κέντρο Ε&Α. Διαθέτουμε αξιόπιστη και πλήρη γραμμή παραγωγής από το σχεδιασμό έως την επιθεώρηση και την αποθήκη, καθώς και υποστήριξη μάρκετινγκ. Τα κύρια προϊόντα μας είναι κυψέλη ηλεκτροφόρησης (δεξαμενή/θάλαμος), τροφοδοτικό ηλεκτροφόρησης, μπλε LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System κ.λπ.
Τώρα αναζητούμε συνεργάτες, τόσο η δεξαμενή ηλεκτροφόρησης OEM όσο και οι διανομείς είναι ευπρόσδεκτοι.
Εάν έχετε οποιοδήποτε σχέδιο αγοράς για τα προϊόντα μας, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Μπορείτε να μας στείλετε μήνυμα στο email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο], ή καλέστε μας στο +86 15810650221 ή προσθέστε το Whatsapp +86 15810650221 ή το Wechat: 15810650221.
Σαρώστε τον κωδικό QR για να τον προσθέσετε στο Whatsapp ή στο WeChat.
Ώρα δημοσίευσης: Δεκ-20-2023