1. Ταξινόμηση
Η ηλεκτροφόρηση γέλης χωρίζεται σε κατακόρυφους τύπους (συμπεριλαμβανομένων πηκτωμάτων στήλης και πηκτωμάτων πλακών) και οριζόντιων τύπων (κυρίως πηκτωμάτων πλακών) (Εικόνα 6-18). Γενικά, ο κατακόρυφος διαχωρισμός είναι ελαφρώς ανώτερος από τον οριζόντιο, αλλά η οριζόντια προετοιμασία γέλης έχει τουλάχιστον τέσσερα πλεονεκτήματα: υπάρχει υποστήριξη κάτω από ολόκληρο το πήκτωμα, επιτρέποντας τη χρήση αγαρόζης χαμηλής συγκέντρωσης. είναι δυνατή η παρασκευή πλακών γέλης αγαρόζης διαφορετικών προδιαγραφών. Η προετοιμασία γέλης και η φόρτωση του δείγματος είναι πιο βολικές. ο θάλαμος ηλεκτροφόρησης είναι εύκολος στην κατασκευή και οικονομικός. Εφόσον η οριζόντια ηλεκτροφόρηση εκτελείται με την πλάκα γέλης αγαρόζης πλήρως βυθισμένη περίπου 1 mm κάτω από την επιφάνεια του ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτροφόρησης, ονομάζεται επίσης βυθισμένη ηλεκτροφόρηση.
Δεξαμενή ηλεκτροφόρησης DYCP-31DN για ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης
2.Buffer System
Στον διαχωρισμό νουκλεϊκών οξέων, τα περισσότερα συστήματα υιοθετούν συνεχή συστήματα. Τα συνήθως χρησιμοποιούμενα ρυθμιστικά διαλύματα ηλεκτροφόρησης περιλαμβάνουν ρυθμιστικό διάλυμα TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L βορικό οξύ, 0,0024mol/L EDTA) και THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol οξικό νάτριο, 0,0018 mol/L EDTA) ρυθμιστικό. Αυτά τα ρυθμιστικά διαλύματα παρασκευάζονται γενικά ως μητρικά διαλύματα 10x και αραιώνονται στην απαιτούμενη συγκέντρωση όταν χρησιμοποιούνται. Οι ρυθμοί μετανάστευσης του γραμμικού και κυκλικού DNA σε γέλη αγαρόζης ποικίλλουν ανάλογα με το ρυθμιστικό διάλυμα που χρησιμοποιείται. Στο ρυθμιστικό διάλυμα THE, ο ρυθμός μετανάστευσης του γραμμικού DNA είναι μεγαλύτερος από αυτόν του κυκλικού DNA, ενώ στο ρυθμιστικό διάλυμα TBE, ισχύει το αντίθετο.
3.Παρασκευή Gel Agarose
(1) Παρασκευή Οριζόντιας Γέλης Αγαρόζης
(α) Παρασκευάστε την απαιτούμενη συγκέντρωση γέλης αγαρόζης χρησιμοποιώντας 1x ρυθμιστικό ηλεκτροφόρησης.
(β) Θερμάνετε την αγαρόζη μέχρι να διαλυθεί πλήρως είτε σε λουτρό με βραστό νερό, σε μαγνητικό αναδευτήρα ή σε φούρνο μικροκυμάτων. Ψύξτε το διάλυμα αγαρόζης στους 55°C και προσθέστε χρωστική βρωμιούχο αιθίδιο (ΕΒ) σε τελική συγκέντρωση 0,5 μg/ml.
(γ) Σφραγίστε τις άκρες των γυάλινων ή ακρυλικών πλακών με μια μικρή ποσότητα γέλης αγαρόζης, προσθέστε μια χτένα και τοποθετήστε τα δόντια της χτένας περίπου 0,5~1,0 mm πάνω από την πλάκα.
(δ) Αδειάζετε το λιωμένο διάλυμα γέλης αγαρόζης συνεχώς στο γυάλινο ή ακρυλικό καλούπι πλάκας (το πάχος εξαρτάται από τον όγκο του δείγματος DNA), αποφεύγοντας την εισαγωγή φυσαλίδων αέρα. Αφήστε το να στερεοποιηθεί φυσικά σε θερμοκρασία δωματίου.
(ε) Αφαιρέστε προσεκτικά τη χτένα μετά από πλήρη στερεοποίηση. Προσθέστε κατάλληλη ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτροφόρησης στη δεξαμενή γέλης, διασφαλίζοντας ότι η πλάκα γέλης είναι βυθισμένη περίπου 1 mm κάτω από την επιφάνεια του ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτροφόρησης.
(2) Παρασκευή του Vertical Agarose Gel
(α) Αφαιρέστε το λίπος ή τα υπολείμματα από τα γυάλινα πιάτα πλένοντας με αιθανόλη.
(β) Τοποθετήστε τις πλάκες διαχωρισμού μεταξύ των μπροστινών και πίσω φραγμάτων, ευθυγραμμίστε τις άκρες των πλακών διαχωρισμού με το μπροστινό και το πίσω φράγμα και στερεώστε τις με σφιγκτήρες.
(γ) Προσθέστε αγαρόζη 2% σε ρυθμιστικό διάλυμα 1x μεταξύ των άκρων των διαχωριστικών πλακών για να σχηματιστεί ένα βύσμα αγαρόζης ύψους 1 cm στο κάτω μέρος του θαλάμου χύτευσης γέλης.
(δ) Χύστε τη λιωμένη γέλη αγαρόζης στην επιθυμητή συγκέντρωση, παρασκευασμένη σε 1x ρυθμιστικό διάλυμα, στον θάλαμο γέλης μέχρι 1 cm κάτω από την κορυφή.
(ε) Εισαγάγετε τη χτένα, αποφεύγοντας να παγιδεύσετε φυσαλίδες αέρα κάτω από τα δόντια της χτένας. Μερικές φορές, μπορεί να εμφανιστούν ρυτίδες στα δόντια της χτένας κατά την ψύξη με τζελ αγαρόζης. Σε τέτοιες περιπτώσεις, απλά προσθέστε λίγη λιωμένη αγαρόζη στην κορυφή για να στερεοποιηθεί.
(στ) Αφαιρέστε τη χτένα. Για να αποτρέψετε τη διαρροή ρυθμιστικού διαλύματος στην υποδοχή φόρτωσης, σφραγίστε τη σύνδεση μεταξύ της πλάκας γέλης αγαρόζης και του θαλάμου ηλεκτροφόρησης με αγαρόζη 2% και προσθέστε την απαιτούμενη ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος.
(ζ) Προσθέστε 1x ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης στον θάλαμο γέλης.
(η) Φορτώστε προσεκτικά δείγματα DNA στο πήκτωμα αγαρόζης κάτω από το ρυθμιστικό διάλυμα.
Περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις βασικές γνώσεις σχετικά με την ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης, θα μοιραστούμε την επόμενη εβδομάδα. Μακάρι αυτές οι πληροφορίες να είναι χρήσιμες για το πείραμά σας.
Η Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ειδικεύεται στην κατασκευή οργάνων ηλεκτροφόρησης για περισσότερα από 50 χρόνια με τη δική μας επαγγελματική τεχνική ομάδα και κέντρο Ε&Α. Διαθέτουμε αξιόπιστη και πλήρη γραμμή παραγωγής από το σχεδιασμό έως την επιθεώρηση και την αποθήκη, καθώς και υποστήριξη μάρκετινγκ. Τα κύρια προϊόντα μας είναι κυψέλη ηλεκτροφόρησης (δεξαμενή/θάλαμος), τροφοδοτικό ηλεκτροφόρησης, μπλε LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System κ.λπ.
Τώρα αναζητούμε συνεργάτες, τόσο η δεξαμενή ηλεκτροφόρησης OEM όσο και οι διανομείς είναι ευπρόσδεκτοι.
Εάν έχετε οποιοδήποτε σχέδιο αγοράς για τα προϊόντα μας, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε μαζί μας. Μπορείτε να μας στείλετε μήνυμα στο email[email προστατευμένο]ή[email προστατευμένο], ή καλέστε μας στο +86 15810650221 ή προσθέστε το Whatsapp +86 15810650221 ή το Wechat: 15810650221.
Σαρώστε τον κωδικό QR για να τον προσθέσετε στο Whatsapp ή στο WeChat.
Ώρα δημοσίευσης: Δεκ-07-2023